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La espectroscopia de fluorescencia es un método para detectar la presencia de moléculas biológicas en solución, mediante el uso de luz fluorescente (fluorescente) como sonda óptica para detectarlas.
La fotometría de fluorescencia es una técnica para medir la cantidad de material fluorescente en solución [1].
El término «fluorescencia» se refiere a la emisión de luz de una molécula o partícula a otra.
Puede medirse directamente con una fuente como un excitador o indirectamente con un instrumento llamado quimioluminiscencia conjugada con fluoresceína (LC).
Este tipo de medición utiliza dos tipos diferentes de moléculas de fluoróforo: fluorocromos y tintes.
[2] A diferencia de otros métodos, que utilizan solo moléculas individuales pero son difíciles de distinguir entre ellas, [3] [4] La espectroscopia de fluorescencia detecta múltiples objetos simultáneamente a través de la detección simultánea en múltiples longitudes de onda.
[5] Una aplicación típica sería determinar si hay sustancias presentes que no hayan sido detectadas por métodos convencionales cuando entran en contacto entre sí.
[6] [7] [8] [9].
El siguiente paso implicaría separar estas diferentes especies para que uno no pueda identificarlas juntas por sí mismas.
Dado que muchos productos químicos pueden reaccionar en determinadas condiciones, este proceso a menudo requiere la realización de varios experimentos antes de poder separar esas especies con suficiente claridad para fines de análisis [10].
Para ello, en primer lugar es necesario medir las diferencias de concentración entre varias muestras y luego realizar pruebas adicionales en muestras individuales; Estos resultados deberían permitirnos saber si todos los componentes químicos están presentes en cantidades iguales en todas las muestras [11].
Esto ha llevado a investigadores de todo el mundo desde sus inicios a principios del siglo pasado [12], en particular Diamant et al., Que utilizaron mediciones de CL junto con estudios experimentales sobre cristales de nitruro de boro.
Se desarrollaron y adoptaron ampliamente técnicas anteriores [13], aunque algunos pueden argumentar que las mediciones de CL por sí solas no proporcionan suficiente información sobre la cantidad de compuestos específicos que existen en las soluciones de agua [14], [15].
Estos investigadores también señalaron que las mediciones de LC por sí solas requieren grandes volúmenes de muestra porque necesitan más del 5% de CO 2, lo que dificulta el uso de equipos altamente sensibles como los sistemas de cromatografía líquida / espectrometría de masas (LC / MS) disponibles en la actualidad.
[16], [17], [18] No obstante, a pesar de que la mayoría de la gente cree que las mediciones de LC por sí solas revelarán lo que realmente está sucediendo dentro de las soluciones de agua, [19], [20], todavía existe una incertidumbre significativa con respecto a qué tan exactos pueden ser nuestros conocimientos sobre las concentraciones hasta que demostremos con éxito aplicaciones del mundo real utilizando instrumentos de alto rendimiento como espectrómetros de masas con trampa de iones o máquinas de separación por cromatografía de gases [21], [22]; sin embargo, los desarrollos recientes han hecho que muchos científicos se den cuenta de que una información cuantitativa más precisa obtenida de datos reales observados experimentalmente podría permitirnos acceder a nuevas áreas donde las investigaciones anteriores habían fallado debido principalmente a la falta de medidas de precisión necesarias para comprender mejor las estructuras moleculares complejas.
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